一、定義與用途
抗熒光淬滅封片劑可以有效地保護熒光染料不被淬滅或破壞,從而延長熒光染料的使用壽命,同時防止實驗過程中產(chǎn)生的熒光背景干擾實驗結(jié)果。它主要用于熒光顯微鏡觀察細胞的實驗中,對熒光組織和細胞樣品進行封片,以減緩熒光淬滅,保持熒光的持續(xù)時間和強度。
二、主要成分
PVA(聚乙烯醇):作為封片劑的主要成分之一,起到增稠、降低表面張力、防止氣泡生成等作用。
甘油:具有保濕性質(zhì),能夠保持細胞膜的完整性,減少蒸發(fā)和揮發(fā)。
DABCO(1,4-二氨基環(huán)己烷):具有活性氮原子的化合物,起到抗熒光淬滅的作用,可以與氧氣、水和其他有機分子形成復(fù)合物,減少熒光分子的不可逆性猝滅作用。
PBS(磷酸鹽緩沖液):用于調(diào)節(jié)試劑的pH值,使其適合于細胞生長和顯微鏡觀察。
DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吡啶):一種DNA染料,用于標(biāo)記細胞核,可以與DNA結(jié)合發(fā)出藍色熒光(但需注意,并非所有抗熒光淬滅封片劑都含有DAPI,具體需根據(jù)產(chǎn)品說明確定)。
三、使用方法
在熒光片子染色完畢后,吸盡液體。
滴一滴抗熒光淬滅封片劑于組織切片或細胞樣品上。
蓋上蓋玻片,盡量避免氣泡產(chǎn)生。
封邊(如使用指甲油等)后即可在熒光顯微鏡下觀察細胞樣品。
四、保存與穩(wěn)定性
保存條件:抗熒光淬滅封片劑通常需要在2~8℃條件下避光保存,以保證其穩(wěn)定性和活性。
穩(wěn)定性:使用封固劑封片后可以穩(wěn)定放置幾周(如23周或24周,具體需根據(jù)產(chǎn)品說明確定),在此期間內(nèi)熒光強度無明顯衰減。
五、注意事項
操作安全:為了安全和健康,使用時需穿實驗服并戴一次性手套操作。
適用范圍:抗熒光淬滅封片劑適用于所有光譜范圍的熒光染料,如FITC、Cy2、Cy3、Rhodamine、Texas Red、Cy5、Cy7、DAPI、AMCA、R6G、Hoechst 33258/33342等。
專用性:此試劑僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途。
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